封閉（blocking）是指在包被之后，利用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液進行再次包被的過程。在抗原或抗體包被時使用的濃度通常較低，這使得固相載體表面仍存在未被占據(jù)的空隙。封閉過程旨在用大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)填充這些空隙，以排斥在ELISA試劑盒后續(xù)步驟中可能干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學(xué)實驗中，封閉劑的使用能夠顯著減少非特異性結(jié)合的發(fā)生。常見封閉劑包括脫脂奶粉、牛血清白蛋白（BSA）、動物血清及Fab片段單鏈二抗等，根據(jù)不同的實驗平臺選擇相應(yīng)的封閉劑。
脫脂奶粉的作用原理在于其含有多種蛋白質(zhì)，能夠有效封閉固相載體（如WB膜、ELISA板等）上的未吸附位點，降低抗體與之結(jié)合的概率，從而避免因非特異性結(jié)合帶來的背景信號增高。脫脂奶粉的優(yōu)點在于其價格低廉且蛋白成分多樣，可以實現(xiàn)全面的封閉效果。然而，由于其成分復(fù)雜且適用范圍較窄，并不適用于生物素和堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體系統(tǒng)，且封閉后的載體不易長期保存，因此在試劑盒生產(chǎn)中較少應(yīng)用。
牛血清白蛋白（BSA）同樣用于封閉未吸附蛋白的固相載體位點。其優(yōu)點在于成分單一，適合于ELISA實驗與其他特異性要求較高的免疫學(xué)檢測實驗。然而，大部分BSA中可能含有少量抗體殘留，可能導(dǎo)致抗原和抗體之間發(fā)生交叉反應(yīng)，從而造成一定的背景信號。
動物血清可以用于封閉非特異性結(jié)合的物質(zhì)，從而降低背景噪聲。同時，血清中可能存在Fc受體能夠與抗體結(jié)合，因此血清不僅可降低非特異性結(jié)合的影響，還可以封閉樣本中的Fc受體，以避免一抗及二抗與樣本Fc受體的結(jié)合。這使得血清在免疫組化和免疫熒光實驗中具有廣泛的應(yīng)用。然而，某些封閉血清中可能含有疊氮鈉，不適用于HRP酶標(biāo)的檢測體系。
Fab片段單鏈二抗的應(yīng)用主要是因為其只有一個結(jié)合位點，能夠完全封閉免疫球蛋白。在IHC或IF雙標(biāo)/多標(biāo)實驗中，能夠有效封閉樣本表面的免疫球蛋白，并解決來自同一物種的一抗之間的干擾。
近年來，新型高效封閉劑Blocker無蛋白封閉劑的問世，為生物醫(yī)療相關(guān)領(lǐng)域帶來了新的選擇。該封閉劑通過化學(xué)合成的高親水性化合物，克服了傳統(tǒng)生物封閉劑在生物安全性和質(zhì)量上的問題。其主要特點包括：與微球表面活化的羧基偶聯(lián)形成穩(wěn)定的共價鍵、批間差小且純度高、能夠充分快速地封閉微球表面，從而降低非特異性吸附與基質(zhì)干擾，并提升試劑的靈敏度。
免疫試劑穩(wěn)定液可用于免疫分析檢測試劑、抗原、抗體和蛋白的保存。這種即用型產(chǎn)品使用簡單方便，只需將待保存物質(zhì)溶于穩(wěn)定液中后置于冰箱即可。其有助于維持蛋白的三維結(jié)構(gòu)，保持生物活性，從而延長免疫分析試劑及蛋白的使用期限，確保產(chǎn)品的性能。
總之，在生物醫(yī)療領(lǐng)域，良好的封閉策略選擇對于免疫實驗的成功至關(guān)重要。而使用新葡萄8883官網(wǎng)AMG所推出的封閉劑，可以更有效地提升實驗的靈敏度，確保實驗結(jié)果的可靠性。
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