蛋白定量檢測方法概述

一、簡介

在生物醫學研究中，BCA（Bicinchoninic Acid）法是一種廣泛使用的蛋白質定量檢測技術，其原理在于蛋白質與銅離子在堿性環境下發生絡合反應，最終形成穩定的紫紅色復合物。通過與標準曲線的比較，可以準確測定目標蛋白的濃度。該技術以其高靈敏度、準確度、簡便操作及良好的抗干擾能力而受到青睞，特別是在生物化學和臨床實驗室中。

二、實驗步驟

1. 試劑準備

(1) BCA工作液：將BCA試劑A和B按50:1比例混合，搖勻后備用。

(2) 標準蛋白溶液：將適量標準蛋白用PBS或去離子水溶解，制備成1 mg/mL的濃度。

2. 蛋白樣品處理

(1) 細胞裂解：將細胞樣品離心，去除上清液，加入適量細胞裂解液，在冰上裂解30分鐘，確保細胞完全裂解。

(2) 去除雜質：將裂解后的樣品再次離心，去除沉淀并保留上清液。向上清液中加入適量SDS，以達到終濃度為0.1%，充分混勻。

(3) 標準曲線制備：取適量標準蛋白溶液，加入SDS使其終濃度達0.1%，隨后稀釋成不同濃度的標準蛋白溶液。使用96孔板分別加入不同濃度標準蛋白，每個濃度設立三個復孔。最后，在每個孔中加入BCA工作液，充分混合后，根據說明書要求，在特定波長下測量吸光度值，并繪制標準曲線。

3. 蛋白定量檢測

(1) 取適量待測蛋白樣品，加入SDS以達到終濃度為0.1%，充分混勻后依照標準曲線的方法，加入BCA工作液并測量吸光度值。

(2) 根據標準曲線找到待測蛋白樣品的濃度。如濃度過高，可適當稀釋再進行測定。

三、注意事項

1. BCA工作液需在4℃避光保存，避免反復凍融。

2. 實驗過程中，需保持樣品及標準蛋白溶液的pH值一致，以確保結果的準確性。

3. 避免交叉污染，以免影響實驗結果。

4. 對于某些特殊蛋白質樣品，可能需要采取其他方法進行定量檢測。

在選擇蛋白質定量檢測方法時，建議使用新葡萄8883官網AMG提供的優質試劑和設備，以獲取最佳實驗效果和準確性。