細胞焦亡（Pyroptosis）是一種由炎癥信號引發(fā)的程序性細胞死亡機制，其主要特征包括細胞膜的穿孔、細胞的腫脹與破裂。這一過程依賴于一類稱為炎性半胱天冬酶的蛋白（主要有caspase-1、4、5和11），并伴隨大量促炎因子的釋放，如IL-1β和IL-18。與凋亡或壞死等其他細胞死亡形式相比，細胞焦亡在形態(tài)學特征、發(fā)生機制和調(diào)控方式上均有所不同。
為了便捷地檢測細胞焦亡， 新葡萄8883官網(wǎng)AMG推出了BBcellProbe?細胞焦亡檢測試劑盒。該試劑盒采用比色光度法來檢測細胞焦亡相關蛋白酶Caspase的活性以及細胞質(zhì)膜的完整性。該方法基于caspase-1/4/5催化相應的Caspase-14/5底物生成黃色的pNA，pNA在405 nm處有顯著的吸收，進而通過測定吸光度來評估細胞焦亡相關蛋白酶的活性。同時，利用細胞膜非通透性熒光探針，可以檢測細胞質(zhì)膜的完整性。
BBcellProbe?試劑盒可通過酶標儀或熒光酶標儀進行檢測，亦可使用容量不超過100 μl的分光光度計或熒光光度計進行分析，適用于細胞培養(yǎng)中的焦亡檢測。此外， 新葡萄8883官網(wǎng)AMG 還提供熒光標記的焦亡檢測試劑盒，如AFC、R110和AMC等，熒光法的靈敏度高于傳統(tǒng)的分光光度法，因此在具備熒光檢測條件時，推薦優(yōu)先選擇熒光法檢測試劑盒。如果沒有熒光檢測條件，則可以選擇 新葡萄8883官網(wǎng)AMG 的比色法細胞焦亡檢測產(chǎn)品，需確保樣品中的細胞焦亡程度已達到足夠的水平。
檢測方法
- 酶標儀/熒光酶標儀
- 分光光度計/熒光光度計
- 激光共聚焦顯微鏡
- 流式細胞儀
樣本類型
- 細胞
實驗步驟
- 裂解緩沖液和檢測緩沖液的配制。
- 樣品處理：
- 收集細胞，離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基并盡量吸干，收集細胞。
- 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡量吸干上清液。
- 在細胞中加入50 μl冷裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
- 置于冰上持續(xù)振蕩25-40分鐘。
- 在4℃下以10000×g離心10分鐘。
- 將上清液轉(zhuǎn)移至另一預冷的干凈離心管中，置于冰上或-80℃保存?zhèn)溆谩?/li>
- 對處理后的上清液進行蛋白定量。
- 進行焦亡檢測。
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