新葡萄8883官網AMG在生物醫療領域中,病毒感染預實驗是一項重要的研究步驟。本實驗以24孔培養板為例,旨在對目的細胞和工具細胞進行感染預實驗。工具細胞可選用293T(人胚腎上皮細胞)、H1299(人肺癌細胞)或其他合適的細胞類型。實驗所需材料包括:培養基、24孔培養板、移液槍、槍頭、EP管、細胞計數板、冰盒及廢液缸等。根據所選目的細胞的特性,可以適量使用Polybrene以提高感染效率。
Day 1:首先,準備細胞。將細胞培養至對數生長期,并利用胰酶消化后計數。根據細胞計數測定細胞密度,每孔接種5×104個細胞,并添加500μL細胞培養液。在一般情況下,H1299或293T細胞在感染后第3天可達到80%-90%融合度。在接種目的細胞時,請根據其生長速度調整接種量,以確保第3天同樣達到80%-90%融合度。
Day 2:接下來,準備慢病毒顆粒。首先計算所需的慢病毒顆粒量,取出凍存在-80℃的病毒顆粒,進行冰浴融化。隨后,觀察培養箱中的細胞狀態及融合度,若細胞情況良好,則開始實驗流程:
A. 小心吸去24孔板中的舊培養液,加入新的完全培養液;
B. 向細胞中加入計算好的慢病毒顆粒液,并輕輕以劃8字的方式在工作臺上混勻;
C. 混勻后,將細胞培養板放置于37℃、5% CO2培養箱中過夜。
Day 3:經過12-16小時的感染后,需更換培養液。將含慢病毒顆粒的培養液吸出,再向培養板中添加含5%滅活FBS(胎牛血清)的新培養液,繼續培養。注意,目的細胞的感染時長需調整,部分細胞不宜感染超過12小時。
Day 4:繼續培養細胞,并觀察細胞狀態是否出現異常。
Day 5:對慢病毒顆粒的感染效率進行觀察與評估。將24孔培養板蓋好,使用70%乙醇清潔培養板外壁,之后在倒置熒光顯微鏡下觀察熒光表達,拍照并估計慢病毒顆粒對細胞的感染效率。如果慢病毒顆粒攜帶的基因表達所需時間較長,可建議在72或96小時后進行熒光觀察。根據熒光表現,可以初步探索出目的細胞的MOI值,為后續實驗奠定基礎。這一系列實驗均可借助新葡萄8883官網AMG的優化系統進行,更加精確和高效。